Colesterol

El Colesterol en suero es objeto de estudio tanto en personas enfermas como sanas.

Para el estudio en clínica, la determinación aislada del mismo no tiene mayor importancia , sin embargo su concentración tiene rangos de variación predecibles en gran número de condiciones clínicas.

El Colesterol es un factor contribuyente en la formación de ateromas (“Placa dura”), y además que el riesgo de contraer enfermedades cardiacas coronarias en individuos que presentan colesterolemia <= 2,10 g/l es 3 veces menor que aquellos individuos con más de 2,30 g/l y 6 veces menor que individuos con más de 2,60 g/l. Sin embargo, es de vital importancia conocer la distribución de las lipoproteínas encargadas del transporte, como lo son las HDL (High Density Lipoprotein), consideradas como “Factor Protector”, ya que es el ancargado de “recolectar” el colesterol de los tejidos y llevarlos al higado para su procesamiento, por otro lado están las LDL (Low Density Lipoproteín), consideradas como “Factor de Riesgo”. Para tener índices predictivos de un proceso patológico es necesario conformar un Perfíl Lipídico con los valores de colesterol total, colesterol de LDL y colesterol de HDL. La determinación de colesterol total incluye la medición de las formas libres y esterificadas del esteroide. En el suero o en el plasma 2/3 del colesterol total se encuentran como éster y el resto en forma libre. Esto tiene cierta importancia analítica ya que en algunas reacciones químicas, el éster del colesterol desarrolla un color más intenso que el colesterol libre, lo cual puede provocar un sesgo positivo. Por esta razón es de suma importancia el conocimiento de la química de los diversos métodos para colesterol y el reconocimiento de sus limitaciones en la elección del método que se empleara en el laboratorio. METODO DE RUTINA

(CHOD-PAP ENZIMÁTICO EN UNA SOLA ETAPA)

Fundamento

El Colesterol es oxidado enzimáticamente por la colesterol oxidasa (CHOD), previa hidrólisis enzimática de los ésteres mediante una lipasa de origen fungal. El Agua oxigenada (H2O2) generada en la oxidación permite la union oxidativa del fenol con la 4-aminoantipirina mediante una reacción catalizada por la peroxidasa (POD). El indicador final es la quinoneimina.

Reacción

CE

Colesterol-esterificado Colestrol + Ac. Grasos libres

CHO

Colesterol + O2 Colesten-3-ona + H2O2

POD

H2O2 + 4-aminoamtipirina + fenol Complejo coloreado

Muestra

Suero ó Plasma Heparinizado o con EDTA.

Ayuno del paciente mínimo 12 horas.

Peso Corporal estable

Si la muestra es plasma , no usar fluoruro, citrato y oxalato pueden causa un pasaje considerable de agua desde los eritrocitos la plasma, generando dilución de sus componentes.

Linealidad.

El test es lineal hasta concentraciones de colesterol de 600 mg/dl. A concentraciones superiores, diluir la muestra 1+1 con solucion fisiologica. Repetir el ensayo y multiplicar los resultados por 2.

Valores de referencia.

Suero/Plasma: 150-260 mg/dl

Consideraciones.

El reactivo de trabajo puede desarrollar un ligero color rosado que no afecta los resultados siempre que se procese un blanco con cada lote nuevo.

Deshechar cuando las lecturas del blanco sean superiores a 0,160 D.O. ó los del estándar sean anormalmente bajos.

El test no es influenciado por valores de hemoglobina hasta 200 mg/dl y de Bilirrubina hasta 5 mg/dl.

Es importante controlar el Agua destilada, pues pueden tener agentes oxidantes que aumenten el color de la reacción.

Es necesario que se incube por 5 minutos a 37° C, debido a que el tiempo y la temperatura es vital para que se desarrollen el total de las reacciones acopladas por las 2 enzimas (CHOD y POD).

MÉTODO DE REFERENCIA

Método de ABELL y col.

Este método consiste en la hidrólisis de los ésteres de colesterilo, extracción con etere de petroleo y desarrollo del color con un reactivo de ácido acético-anhídrico acético -ácido sulfúrico . Con el equipo apropiado y buena habilidad técnica se pueden obtener resultados exactos y precisos. La preparación consiste en la extracción del colesterol con Zeolina, hidrólisis química de los ésteres (Saponificación) y medición del colesterol total por la reacción de Liebermann-Burchard , la desventaja que tiene es que es un método muy laborioso.

MÉTODO ALTERNATIVO.

Método enzimático de punto final.

Fundamento.-

El Fundamento es básicamente el mismo que el método descrito anteriormente en el Método de Rutina, salvo que se reemplaza la 4-aminoantipirina por 4-aminofenazona(4-AF), y el producto final de la unión oxidativa de éste con el fenol genera 4(P-benzoquinona monoimino) fenazona + 4H2O , lo que genera un complejo coloreado medible a 500 nm.

Reacción.-

Ésteres de colesterol colesterol + ac. grasos

Lipasa

Colesterol + O2 colest-en-3-ona + H2O2

CHOD

H2O2 + 4-AF+fenol 4(p.benzoquinona monoimino) fenazona + 4H2O

POD

HDL-COLESTEROL

La incidencia de las enfermedades cardiacas coronarias tiene una correlación inversa con el nivel sérico de HDL(High Density Lipoproteín) colesterol, osea que a mayor concentración de HDL-Colesterol, menor es la incidencia de la enfermedad y viceversa.

Aparentemente la relación esta dada por el hecho que las HDL transportan el colesterol desde los tejidos perisfericos para ser metabolizados por el higado, evitando así la proliferación y crecimiento de lesiones ateromatosas.

Existe HDL aumentado en mujeres , niños y negros. En la enfermedad de Tangierexiste déficit de síntesis de HDL, acumulando colesterol en los tejidos.

El colesterol ligado a HDL es en promedio el 20 % del colesterol total en hombres y 22,5% en mujeres.

Recuentos celulares hematológicos

SERIE BLANCA (LEUCOCITOS)

Los leucocitos, desde el punto de vista morfológico se dividen en granulocitos (polimorfonucleares), monocitos y linfocitos; los granulocitos a su vez, en neutrófilos, eosinófilos y basófilos. El aumento o disminución del número total de leucocitos se denomina leucocitosis o leucopenia respectivamente; éstas pueden involucrar todas las líneas celulares o sólo un tipo específico de ellas; razón por lo que todo contaje leucocitario debe incluir el recuento diferencial.

El recuento diferencial enumera cada tipo de leucocito en cifras porcentuales o relativas; se cuentan 100 células en un frotis de sangre periférica, sin importar el grado de madurez o diferenciación y los resultados se reportan en los porcentajes de cada tipo contado. De igual manera, para la interpretación precisa del aumento o disminución de alguna línea celular es necesario calcular su cifra absoluta, de acuerdo a la siguiente ecuación:

Cuenta absoluta células/ mm³ = cuenta diferencial relativa (%) x cuenta leucocitaria (leucocitos /mm³) / 100

Valores absolutos normales (mm³)

• Leucocitos: 4.500-10.000
• Neutrófilos: 3.000-6.000
• Eosinófilos: 50–300
• Basófilos: 0-75
• Linfocitos: 1.500-3.000
• Monocitos: 150-700     

El núcleo de los granulocitos se segmenta progresivamente a medida que va madurando; según el número de lóbulos del núcleo puede predominar cualquiera de sus formas inmaduras: cayados, metamielocitos, mielocitos o promielocitos; a estos hallazgos se le denomina desviación a la izquierda, típico de las infecciones bacterianas agudas (recordar que los cayados son las células que preceden inmediatamente a los polimorfonucleares). La alteración de los granulocitos puede ser cuantitativa (leucocitosis y leucopenia) o cualitativa (trastornos funcionales de los fagocitos); esta última es rara y obviamente existe susceptibilidad a las infecciones.

LEUCOCITOSIS. Se refiere al incremento del número de leucocitos circulante por encima de 10.000 por mm³. El aumento puede incluir uno o más subgrupos de leucocitos circulantes: granulocitos (neutrófilos, eosinófilos y basófilos), monocitos o linfocitos. La mayoría de las veces es por un solo tipo de leucocito, generalmente neutrófilos, con aumento moderado de las otras series. Recordar que un 5% de la población normalmente tiene una cuenta blanca fuera de los límites normales. Un paciente con leucocitosis puede presentarse en tres formas:

• Con un conjunto inicial de síntomas y signos
• Con una enfermedad de base conocida; por ejemplo, una leucemia mieloide o linfoide crónica
• Con un examen de laboratorio de rutina

La historia clínica y el examen físico del paciente son importantes para orientar las posibilidades de la leucocitosis; por ejemplo, una leucocitosis con neutrofilia y eosinopenia se pueden observar en pacientes con esplenectomía, inflamaciones crónicas y por el uso crónico de esteroides. En la drepanocitosis puede haber leucocitosis por ausencia del bazo o por incremento de la hematopoyesis (la médula ósea responde como un todo, “concepto de eritrón”); esta leucocitosis puede ser el anuncio de una crisis hemolítica y se considera un factor predictivo de gravedad.

Una falsa leucocitosis se observa cuando existe aumento de normoblastos en la sangre periférica, éstos interfieren en el contaje blanco, hecho que obliga a corregirlo. Igualmente, la pseudoleucocitosis, en las crioglobulinemias, que al precipitar en frío, forman una película que es contada erróneamente por los contadores automatizados.

Neutrofilia. Se refiere al aumento absoluto de los neutrófilos en la sangre periférica por encima de 6.000 por mm³ y es la causa más común de leucocitosis, a saber:

• Trastornos inflamatorios: artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, polimiositis y tiroiditis.
• Hemorragia aguda (la leucocitosis se debe a la respuesta global de la médula ante el estímulo hemorrágico)
• Enfermedades hematológicas: leucemias (agudas y crónicas) y crisis de una anemia hemolítica
• Emergencias médicas: quemaduras, politraumatismos, infarto del miocardio, infecciones bacterianas agudas (reacciones leucemoides), cetoacidosis diabética, eclampsia, tirotoxicosis “tormenta tiroidea”, uremia e intoxicaciones (plomo, mercurio, quinina y cigarrillo)

Eosinofilia. Se refiere al aumento absoluto de los eosinófilos en la sangre periférica por encima de 300 mm³. Generalmente la eosinofilia no es muy intensa, aunque en algunas enfermedades puede llegar a ser severa (> 1.500 mm³). Las causas más comunes son:

• Enfermedades alérgicas. Se acompañan generalmente de un aumento de la IgE sérica; las más frecuentes son: asma bronquial, urticaria, edema angioneurótico, enfermedad del suero, vasculitis, alergia a los alimentos y medicamentos.
• Parásitos e infecciones. Los más notables son las que invaden los tejidos como la triquinosis (T. spirallis), equinococosis (quiste hidatídico por Echinococcus), toxocarosis (larva migratoria visceral por Toxocara canis) y filariasis por Wuchereria. También se observan en la parasitosis intestinal por Necátor americanus, Strongyloides stercoralis y Áscaris lumbricoides; este último, en su paso por el pulmón produce una neumonía eosinófila (síndrome de Löffler) y, finalmente, en ectoparasitosis como la escabiosis.
• Dermatopatías: psoriasis, pénfigo, eczema y dermatitis herpetiforme.
• Neoplasias: linfomas Hodgkin y no Hodgkin a células T periférico, policitemia vera, leucemia mieloide crónica y micosis fungoide.
• Enfermedades hematológicas: estados post-esplenectomía, anemia perniciosa y anemia drepanocítica.
• Otras: artritis reumatoide, periarteritis nudosa, colitis ulcerativa y el síndrome hipereosinofílico idiopático.

Basofilia. Se refiere al aumento absoluto de los basófilos en la sangre periférica por encima de 75 mm³. Las causas más comunes son: síndromes mieloproliferativos crónicos (leucemia mieloide crónica), mixedema, colitis ulcerativa y medicamentos (estrógenos y drogas antitiroideas).

Linfocitosis. Se refiere al aumento absoluto de los linfocitos en la sangre periférica por encima de 3.000 por mm³ (siempre que no exista leucopenia con neutropenia absoluta).

Es normal entre los 4 meses y 4 años de edad. Las causas más comunes son:

• Infecciones agudas: mononucleosis infecciosa (Epstein-Barr y Citomegalovirus), eruptivas de la infancia, tosferina, neumonías virales; protozoarios (toxoplasmosis) y linfocitosis infecciosa aguda.
• Infecciones crónicas: brucelosis, tuberculosis y sífilis congénita
• Enfermedades hematológicas: leucemia linfocítica aguda y linfoide crónica, enfermedad de cadenas pesadas y linfoma no Hodgkin de bajo grado.
• Endocrinopatías: tirotoxicosis y enfermedad de Addison.
• Reacciones alérgicas (medicamentos y alimentos)

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El laboratorio de analisis clinicos

El Laboratorio clínico es el lugar donde los profesionales de laboratorio de diagnóstico clínico (Tecnólogo Médico, Técnicos Superiores de Laboratorio Clínico, Bioquímicos, Químicos Farmacobiólogos (QFB) y Médicos) realizan análisis clínicos que contribuyen al estudio, prevención, diagnóstico y tratamiento de los problemas de salud de los pacientes. También se le conoce como Laboratorio de Patología clínica. Los laboratorios de análisis clínicos, de acuerdo con sus funciones, se pueden dividir en:

• Laboratorios de Rutina. Los laboratorios de rutina tienen cuatro departamento básicos: Hematología, Inmunología, Microbiología y Química Clínica (o Bioquímica).Los laboratorios de rutina pueden encontrarse dentro de un hospital o ser externos a éste. Los laboratorios hospitalarios, con frecuencia tiene secciones consideradas de urgencia, donde se realizan estudios que servirán para tomar decisiones críticas en la atención de los pacientes graves. Estudios tales como citometría hemática, tiempos de coagulación, glucemia, urea, creatinina y gases sanguíneos.

• Laboratorios de Especialidad. En los laboratorios de pruebas especiales se realizan estudios más sofisticados, utilizando metodologías como amplificación de ácidos nucléicos, estudios cromosómicos, citometría de flujo y cromatografía de alta resolución, entre otros. Estas pruebas requieren instalaciones y adiestramiento especial del personal que las realiza. Con frecuencia, estos laboratorios forman parte de programas de investigación.

Es importante también considerar, dentro del proceso de análisis, la obtención de las muestras biológicas. Este proceso conocido como toma de muestras, abarca la flebotomía, proceso por el cual se extráe una muestra de sangre; la obtención de otro tipo de muestras, como orina y heces; y la extracción de otros líquidos corporales, como líquido cefalorraquídeo o líquido articular.